染料常见问题解答
1、干粉产品溶解和储存建议
收到干粉产品后，应将其保存在-20℃或以下。探针干粉在室温下可稳定保存超过一周，在-20℃下可稳定保存超过12个月。
我们建议使用新开封的无水DMSO来制备1000倍母液。在与空气和水分接触时，DMSO会产生降解产物，这极有可能会缩短探针溶液的保存期限，即便在-20℃条件下也是如此。使用后，应将探针的母液保存在-20℃以下，母液不建议分装。染料可以反复冻融，但每次打开产品前，应让其先恢复至室温。在正确溶解和储存的情况下，染料母液可以稳定保存至少3个月。
如需长期储存，建议产品开封后使用DMF或者任意比例的乙腈水溶液溶解产品后分装，真空干燥、冻干或者氮气吹干后可长期保存。
2、维拉帕米（Verapamil）的作用和用法
对于一些不容易透膜标记靶点的探针，在不影响实验设计的前提下，我们推荐使用维拉帕米（一种钙通道阻滞剂）增加染料在细胞内的保留，以提高染色效率，探针是否推荐搭配维拉帕米使用应该根据样品实际成像效果选择，在不同细胞实验中可能差异巨大，也可参考染料的网站介绍或网站产品详情页的电子版说明书。
一般建议是1-10μM的终浓度，在整个染色到拍摄的全过程中都使用，例如在配置染色工作液时即加入适当浓度的维拉帕米，然后进行孵育染色，在染色结束如果进行进一步清洗，那么在清洗后仍然加入适当浓度的维拉帕米，以保证长时间拍摄时的稳定性。如果样品的荧光信号较弱，建议在维拉帕米存在下重复染色。
如果产品附赠维拉帕米，使用时将内容物溶解在5μL的DMSO中，以制备10mM（1000x）储备液。或者根据随附说明进行操作。
提示：Verapamil不是浦海景珊和Spirochrome的产品。上述条件是推荐的预实验条件测试起点，因为维拉帕米的效果可能因所使用的细胞类型或生物体而异。应使用不同浓度的维拉帕米和探针进行小规模实验，以优化弱染色样品的染色效率。作为外排泵抑制剂和钙通道抑制剂，维拉帕米可能对活体样品产生副作用。
3、使用线粒体探针时会染到细胞内质网
常见原因是染色浓度过高（染色时间过长），或者激发光功率太高；另外则是因为线粒体染料有一定的亲脂性，用量过高或者线粒体损伤后染料释放出来游离在环境中就可能会染到内质网，建议降低浓度试一下，或者多洗几次，或者染完后放一会再拍，通常能够解决问题。
4、线粒体染色后背景过高或者线粒体形态不好有哪些可能，如何优化
成像数据背景过高，导致线粒体信号过高看不出线粒体正常形态，首先考虑染料用量过大，也就是染色浓度太高了，可以将染色浓度降低一些，使用1:2000或者更低（根据实际成像结果或者信号强度判断），还有尽量不要室温染色，线粒体本来就是对环境敏感的细胞器，除非样品本身孵育温度就是室温，否则要在37℃染色，在染完色后，可以用共聚焦设备/模式看看染色效果：背景信号是否过高、线粒体形态是否良好？如果信噪比和形态都很好，清洗1-2次后换上新的预热的培养基，再孵育20-30min，这样线粒体形态会更好，也能进一步优化信噪比。
超分辨成像是很综合很注重细节的实验，好的数据对制样质量要求较高，一定要注意样本的状态是否良好，样本状态对于成像结果的影响比想象中要大很多，也不必拘泥于说明书步骤，因为实验影响因素太多，说明书只能提供一些基础框架，这种操作上的宽容度既是超分辨实验的优势也是难点，一定是要参考实际成像效果进行条件优化的，优化的目的是用最少的染料，完成染色标记需求，减少各种试剂对细胞的影响。
5、PKMITO®系列线粒体探针能否标记植物细胞线粒体或者海洋生物线粒体
目前测试了几种植物根尖细胞和拟南芥叶片，效果都不理想，所以不推荐使用PKMITO®系列染料标记植物细胞线粒体。除了透膜不理想的问题，植物细胞线粒体内外膜电势差也比动物细胞小，所以也存在标记效率低的问题。海洋生物也是类似的原因，效果不是很理想，不过由于生物种类各异，还是可以尝试一下。目前衣藻、水熊虫、某些植物细胞原生质体上都有成功的案例。
6、自标记蛋白质标签技术使用流程简介
a. 构建含有外源protein-tag基因的质粒或进一步包被病毒；
*本公司可提供系列质粒及病毒
b. 进行质粒转染或病毒侵染将相关基因导入活细胞中；
*请自行购买转染试剂并按照说明操作，确保细胞在转染后状态健康并定期进行支原体检测
c. 确认质粒转染效率及外源protein-tag基因表达情况（可使用GFP作为内参）；
*该步骤至关重要：只有确认外源基因成功表达，后续小分子荧光配基的染色步骤才有意义，大部分阴性实验结果的原因均在于未对本步骤进行有效的质量控制
d. 进行相应小分子荧光配体的染色与洗涤；
*具体染色方案及是否洗涤请参考特定染料的说明书
e. 进行活细胞成像，也可以将细胞固定后成像。
*如需进行固定细胞成像，推荐先染色后固定；如必须在染色前先固定，请尽量在固定后半小时内完成染色，否则将影响成像效果
